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        產(chǎn)品名稱(chēng):

        豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒

        產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-07-05
        豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒采用聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)檢測豬血清和組織中的PRV,適用于PRV的檢測、診斷和流行病學(xué)調查,對豬偽狂犬病病毒引起的疾病診斷及療效評估有重要指導意義。

        產(chǎn)品概述

          豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用說(shuō)明
         
          【試劑盒簡(jiǎn)介】
         
          豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒,采用聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)檢測豬血清和組織中的PRV,適用于PRV的檢測、診斷和流行病學(xué)調查。
         
          【原理】
         
          提取DNA作為模板,在DNA聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán),使特異DNA片段的拷貝數放大數百萬(wàn)倍。將擴增的DNA片段進(jìn)行電泳、染色后,在紫外燈下,肉眼可見(jiàn)DNA片段的擴增帶。

              【試劑盒組份】 

        1. 裂解液 8mL 8. 陽(yáng)性對照  
        2. 蛋白酶K 110μL 9. 0.2 mL 薄壁PCR 管 15個(gè)
        3. 抽提液 8mL 10. PCR 反應液A 180μL
        4. 異丙醇 7mL 11. PCR 反應液B 50μL
        5. 洗滌液 12mL 12. 50 倍TAE 電泳緩沖液 20mL
        6. 無(wú)菌水 500μL 13. 染色液  
        7. 陰性對照 300μL   10μL
         
         
          注:塑料袋內試劑(陽(yáng)性對照、蛋白酶K、PCR反應液A和B)-20 ℃凍存,其他室溫保存。
         
          黃曲霉毒素M1檢測試劑盒(酶免)
         
          三聚氰胺檢測試劑盒(酶免)
         
          磺胺二甲基嘧啶檢測試劑盒(酶免)
         
          孔雀石綠定量檢測試劑盒(酶免)
         
          金霉素定量檢測試劑盒(酶免)
         
          【豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒操作方法】
         
          一、病毒DNA的提取
         
          1.取出已處理的樣品、陰性對照和陽(yáng)性對照,分別加入600µL抽提液(用抽提液之前不要晃動(dòng),不要吸到上層保護液),用力顛倒10次混勻,12,000rpm離心10min。
         
          2.取500µL上清置于滅菌離心管中,加入500µL異丙醇,混勻,置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出樣品管,室溫融化,13,000rpm離心15min。
         
          3.棄上清,沿管壁緩緩加入1mL洗滌液,輕輕旋轉一周后倒掉,將離心管倒扣于吸水紙上1min,再將離心管真空抽干15min或37℃烘干。
         
          4.用30µL無(wú)菌水溶解沉淀,作為模板備用。
         
          二、樣品制備
         
          1.樣品采集:病死或撲殺的豬,取大腦海馬背側皮層、中腦、腦橋、扁桃體、淋巴結等組織;待檢活豬,用棉拭子取鼻腔分泌物,置于50%甘油生理鹽水中,或用注射器取血5mL,2~8℃保存。(要求送檢病料新鮮,嚴禁反復凍融。)
         
          2.樣品處理:
         
          2.1組織樣品的處理:稱(chēng)取組織0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理鹽水繼續磨至無(wú)塊狀物;然后將樣品轉至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心5min,取上清100µL于1.5mL滅菌離心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混勻后37℃溫育1h。
         
          2.2全血樣品的處理:待血凝后取血清放于離心管中,8000rpm離心5min,取上清100µL于1.5mL滅菌離心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混勻后37℃溫育1h。
         
          2.3陽(yáng)性對照的處理:混勻后取100µL于1.5mL滅菌離心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混勻后37℃溫育1h。
         
          2.4陰性對照的處理:混勻后取100µL于1.5mL滅菌離心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混勻后37℃溫育1h。
         
          三、PCR
         
          1.反應體系:分別取16µLPCR反應液A(用前混勻)、2µLPCR反應液B(用前混勻)和2µL模板DNA,混勻。
         
          2.反應程序:在PCR儀上運行以下程序:94℃3min;94℃30s、55℃30s、72℃30s,35個(gè)循環(huán);72℃延伸10min。
         
          四、電泳
         
          1.制膠:用50倍稀釋的TAE電泳緩沖液配制1%瓊脂糖凝膠。
         
          2.電泳:待膠凝固后,取5µLPCR擴增產(chǎn)物點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中,以5V/cm的電壓于50倍稀釋的TAE電泳緩沖液中電泳。
         
          3.染色:取50倍稀釋的TAE電泳緩沖液30mL,加入10µL染色液,混勻后將膠浸泡30min,于紫外燈下觀(guān)察結果。
         
          【結果判斷】
         
          陽(yáng)性對照出現400bp擴增帶,陰性對照無(wú)帶出現(引物帶除外)時(shí),實(shí)驗結果成立。被檢樣品出現400bp擴增帶為豬偽狂犬病毒陽(yáng)性,否則為陰性。
         
          【需用但未提供的材料】
         
          組織研磨器、眼科剪、眼科鑷、一次性注射器、瓊脂糖、滅菌1.5mL離心管和吸頭(10µL、200µL、1000µL)。
         
          【豬偽狂犬病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒注意事項】
         
          1.本試劑盒有效期為6個(gè)月,不要使用超過(guò)有效期限的試劑,試劑盒之間的組分不要混用。
         
          2.所有試劑應在規定的溫度儲存,使用時(shí)拿到室溫下,使用后立即放回。
         
         

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